proktolog w poznaniu

W celu dalszej walidacji prawidłowej funkcji kanału, skonstruowaliśmy mysie linie komórkowe ND7 / 23 oparte na DRG NaV1.9 i sfGFP-NaV1.9 stabilne DRG pochodzące od DRG, łącząc system Flp-In oparty na rekombinacji Flp (oparty na FRT) (Thermo Fisher) Naukowe) z intronowym wzmocnieniem ekspresji genów, techniką, która prowadzi do zwiększonej akumulacji mRNA i białka w stosunku do niezmienionego cDNA (44). Dodatkową korzyścią tego podejścia było zmniejszenie niepożądanych zdarzeń przegrupowania podczas propagacji cDNA kanału NaV w bakteriach. Mysi gen SCN11a jest kodowany przez 24 eksony o znanych granicach egzon / intron (45). Chociaż nie uzyskano wystarczającej ekspresji przy użyciu mysiego cDNA pozbawionego endogennego intronu lub z dodatkiem C-końcowego GFP (46), konsekwentnie widzieliśmy prąd NaV1.9 z cDNA zawierającym intron 2, który zwiększał się po różnicowaniu komórek ND7 / 23 w pożywka zawierająca NGF (100 ng / ml) i 1% FBS (Figura 1, F i G). RT-PCR i sekwencjonowanie potwierdziły prawidłowe wycięcie intronu 2 w celu utworzenia dojrzałych kanałów (45). Continue reading „proktolog w poznaniu”

Mutacja choroby ujawnia rolę NaV1.9 w ostrym świądzie

Swędzenie (świąd) i ból stanowią dwie odmienne modalności sensoryczne; jednak obie ewoluowały, aby ostrzec nas o potencjalnie szkodliwych bodźcach zewnętrznych. W porównaniu z bólem, nasze zrozumienie świądu wciąż rodzi się. Poniżej przedstawiamy nowy kliniczny przypadek osłabiającego świądu i zmienionego odczuwania bólu wynikającego z mutacji heterozygotycznej de novo p.L811P wzmocnienia funkcji w NaV1.9, podtypu kanału sodowego (NaV) bramkowanego napięciem, który przekazuje informacje sensoryczne z peryferia do kręgosłupa. Aby zbadać rolę NaV1.9 w swędzeniu, opracowaliśmy linię myszy, w której kanał jest znakowany N-końcowo białkiem fluorescencyjnym, umożliwiając w ten sposób niezawodną identyfikację i biofizyczną charakterystykę neuronów wyrażających NaV1.9. Oceniliśmy również wpływ NaV1.9 na świąd przy użyciu nowo utworzonego NaV1.9. Continue reading „Mutacja choroby ujawnia rolę NaV1.9 w ostrym świądzie”

Znalezienie igły w stogu siana: sekwencjonowanie całego genomu i odkrycie mutacji w modelach mysich

Ostra białaczka promielocytowa (APL) jest nowotworem złośliwym szpiku kostnego, w którym występuje niedobór komórek mieloidalnych i nadmiar niedojrzałych komórek zwanych promielocytami. APL najczęściej jest powodowany przez translokację (15:17) i ekspresję białaczki promielocytowej i receptora retinowego. (PML-RARA) produkt fuzyjny; jednak zdarzenia, które współdziałają z PML-RARA w patogenezie APL, nie są dobrze poznane. W tym wydaniu JCI Wartman i jego współpracownicy stosują innowacyjne podejście, aby znaleźć inne istotne mutacje w APL. Przeprowadzili oni sekwencjonowanie całego genomu i analizę liczby kopii dobrze scharakteryzowanego modelu mysiego APL, aby odsłonić mutacje somatyczne w demielowanej ekspresie Jakl i lizynie (K) 6A (Kdm6a, znanej również jako Utx) u myszy z APL i zweryfikować zdolność Jak1 mutacje do współpracy z PML-RARA w APL. Continue reading „Znalezienie igły w stogu siana: sekwencjonowanie całego genomu i odkrycie mutacji w modelach mysich”