Schemat ideowy elastycznej przyspieszonej Neo-STOP kasety indukowalnej tetracykliną (FAST) ilustrujący generowanie globalnych nokautowych myszy NaV1.9 (czerwona ramka) i ekspresji znakowanej samouczkiem myszy NaV1.9 znakowanej SFGF (zielona ramka) ). (C) Sekcja DRG z myszy NaV1.9 (na górze) z tagiem sfGFP i myszy WT (na dole) pokazujące nakładanie się między endogennym sygnałem fluorescencyjnym (zielonym) i autofluorescencją, a następnie barwienie przeciwciałem przeciwko GFP (czerwone). (D) Western blot tkanki DRG z WT, sfGFP-NaV1.9 i NaV1.9. /. mysz barwiona na GFP. Przeciwciało HSP90 zastosowano jako kontrolę obciążenia. (E) Western blot tkanek pobranych od myszy sfGFP-NaV1.9 i zabarwionych na GFP, odpędzono i powtórzono w przypadku NaV1.9, stosując komercyjne przeciwciało. Przeciwciało HSP90 zastosowano jako kontrolę obciążenia. TG, zwoje trójdzielne. (F i G) Reprezentatywne ślady prądu z linii komórkowych ND7 / 23 wyrażających kanały WT (czarne) lub sfGFP-NaV1,9 (zielone). (H. J) Napięcie prądu (IV) (H) i wyprowadzone napięcie przewodnictwa (GV) (I) i zależności inaktywacji w stan ustalony (SSI) (J) WT (czarny) i sfGFP-NaV1.9 (zielony ). (GV: WT-NaV1, 9 V1 / 2 = A 25,5 . 0,5 mV, n = 16, GFP-NaV1, 9 V1 / 2 = <24,0> 0,2 mV, n = 11, P = 0,52; SSI: WT-NaV1 .9 Vl / 2 => 29,3> 3,5 mV, n = 7; GFP-NaV1, 9 Vl / 2 = <26,6 <1,7 mV, n = 7, P = 0,49). Dane są reprezentowane jako średnie. SEM. Pasek skali: 50 .m. Generowanie i charakteryzowanie linii myszy NaV1 oznaczonej sfGFP. Aby określić wzór ekspresji NaV1.9, zastosowaliśmy linię myszy, w której kanał został połączony z fluorescencyjnym reporterem. Aby ograniczyć wpływ na funkcję i ekspresję NaV1.9, używaliśmy (a) superfolderu zielonego białka fluorescencyjnego (sfGFP), generacji GFP o wzmocnionej kinetyki fałdowania (34); (b) ukierunkowane na N-koniec kanału dla fuzji sfGFP (17, 35); i (c) zoptymalizowany pod względem kodonów (36) sfGFP. Korzystając z elastycznej przyspieszonej techniki indukowalnej tetracykliną (FAST) Neo-STOP (37), wstawiliśmy sfGFP natychmiast po endogennym kodonie start (rysunek 1B). Oryginalna kaseta domina zawierała konstrukt (loxP-FRT-Neo-STOP-FRT-tetO-loxP), który doprowadził do globalnego fenotypu nokautu NaV1.9 (myszy NaV1, 9 (3 / / FAST). Ten szczep miał dodatkową zaletę, że był zdolny do (a) kontrolowanej tetracykliną kontrolowanej przez transaktywator (zależnej od tTA) i (b) kontrolowanego tetracykliną pośredniego tłumienia warunkowego transkrypcji z udziałem tTS (za pośrednictwem tTS) (Figura 1B). Przez skrzyżowanie myszy SFGFP-NaV1.9 FAST (C57BL / 6J) z globalną myszą Cre (B6.C-Tg (CMV-cre) 1Cgn; The Jackson Laboratory), uzyskano linię, w której endogenny NaV1.9 był N- ostatecznie połączony z SFGFP. Jak widać na Figurze 1C, podzbiór zdysocjowanych DRG wykazywał silny sygnał fluorescencji, który pokrywał się z przeciwciałem GFP, podczas gdy tkanka WT wykazywała słabą fluorescencję tła. Analiza biochemiczna DRG wykazała obecność prążka GFP + w odpowiedniej wielkości dla znaczonego sfGFP NaV1.9, którego nie obserwowano w mysich DRG zawierających kasetę WT lub FAST (Figura 1D). Odpowiednio, ilościowa PCR z odwrotną transkryptazą (RT-qPCR) nie wykryła RNA NaV1.9 w DRG myszy FAST. Blotting dla GFP, a następnie odpędzanie i ponowne badanie Western blot przy użyciu przeciwciała NaV1.9 (38) ujawniło dodatni prążek zarówno w DRG, jak i zwojach nerwu trójdzielnego. Oprócz tych tkanek ekspresja NaV1.9 nie była obserwowana w mózgu ani innych głównych narządach (Figura 1E). Po potwierdzeniu ekspresji fluorescencji, próbowaliśmy następnie ustalić, czy właściwości bramkujące sfGFP znakowanego NaV1.9 zostały zmienione w porównaniu z nieonagodzonym NaV1.9. Nagrania patch-clamp z fluorescencyjnych neuronów czuciowych w obecności tetrodotoksyny (TTX) i CsF w pipecie z łatką ujawniły funkcjonalny kanał sfGFP-NaV1.9 z zachowaniem bramkowania WT i kinetyką, jak opisano w literaturze (ref. [więcej w: kozieradka zastosowanie, olx myślenice, uxtorpeda allegro ]
doradztwo prawne i obsługa prawna na Górnym Śląsku
Random entries
Wyniki domowej interwencji środowiskowej wśród miejskich dzieci z astmą czesc 4
Jest jednak mało prawdopodobne, że zespoły oceniające zostały zamaskowane w grupie badanej z powodu obecności materiałów do nauki, takich jak odkurzacze HEPA w domach rodzin z grup interwencyjnych. Mierniki rezultatu… Read More Wyniki domowej interwencji środowiskowej wśród miejskich dzieci z astmą czesc 4
Odwrotność stężeń lipoproteiny osocza (a) z wielkością izoformy apolipoproteiny (a) nie wynika z różnic w katabolizmie Lp (a), ale z różnic w szybkości produkcji.
DevURLLipoproteina (a) (Lp [a]) jest aterogenną lipoproteiną, która ma podobną strukturę do lipoprotein o małej gęstości (LDL), ale zawiera dodatkowe białko zwane apolipoproteiną (a) (apo [a]). Apo (a) ma duże… Read More Odwrotność stężeń lipoproteiny osocza (a) z wielkością izoformy apolipoproteiny (a) nie wynika z różnic w katabolizmie Lp (a), ale z różnic w szybkości produkcji.
Tags
bogowie cda
kalafior wartości odżywcze
kalarepa kalorie
kalprotektyna
kardiowersja elektryczna
klasterowe bóle głowy
klasyfikacja icd 10
kminek właściwości
kolano budowa
kolka nerkowa icd 10
kolka nerkowa objawy
kora debu
kozieradka zastosowanie
krążek międzykręgowy
kłykciny kończyste leczenie
martwa cisza cda
mcz lubin
olx myślenice
olx parczew
olx sulechów
uxtorpeda allegro