przychodnia na szafera szczecin

Podsumowując, odkrycia te sugerują, że autokrynne wytwarzanie IL-6 może być powszechną cechą guzów płuc o różnym pochodzeniu. Komórki nowotworowe linii BALB / c TKO są podatne na chemiczne hamowanie sygnalizacji NF-kB. Chociaż IL-6 odgrywa wyraźną rolę w promowaniu optymalnego wzrostu nowotworu w tym układzie, jest mało prawdopodobne, aby zwiększona sygnalizacja IL-6 w pełni uwzględniała zwiększone ryzyko powstania nowotworu płuc u myszy TKO BALB / c. Jak pokazano powyżej, IL-17 była również podwyższona u myszy TKO BALB / c (Figura 3), a komórki nowotworowe bezpośrednio wytwarzały VEGF oprócz licznych zapalnych chemokin (Figura 4 i Suplementowa Figura 4). Jak omówiono wcześniej, wykazano, że NF-kB sprzyja tworzeniu nowotworów w modelach raka płuc związanego z paleniem; w związku z tym zastanawialiśmy się, czy aktywacja NF-kB może odgrywać rolę w nowotworach BALB / c TKO. Składniki zarówno NF-kB jak i NF-kB są łatwo wykrywalne w jądrowych frakcjach białkowych z komórek MDAC8 (figura 6A i dodatkowa figura 5). Potwierdzenie kluczowej funkcji sygnalizacji NF-kB w tym układzie, połączone hamowanie kinazy I (B (IKK1) i IKK2 przy użyciu dwóch chemicznie różnych inhibitorów doprowadziło do gwałtownego spadku poziomów jądrowych NF-kB p65 (Figura 6A) i odpowiadająca utrata żywotności w traktowanych komórkach (P = 0,001) (Figura 6B). Selektywne inhibitory IKK2 nie były skuteczne w zmniejszaniu jądrowej NF-kB p65 (Figura 6A) i nie miały dostrzegalnego wpływu na żywotność komórek nowotworowych (Figura 6B). Utratę żywotności komórek wykrywano w ciągu dnia leczenia (P = 0,001 w ciągu 24 godzin) (Figura 6C) i występowało w sposób zależny od dawki (P <0,0001 dla dawek większych niż 4 .m) (Figura 6D). Figura 6 Hamowanie sygnalizacji NF-pB w linii komórek nowotworowych płuc BALB / c TKO prowadzi do szybkiej utraty żywotności. (A) Western blot lizatów jądrowych z komórek MDAC8 hodowanych przez godzinę z inhibitorem IKK2 (IKK2i), połączonym inhibitorem IKK1-IKK2 (IKK1 / 2i) lub zaróbką (DMSO); Dane w A i B reprezentują próbki analizowane z 2 niezależnych hodowli. (B) 3 × 105 komórek MDAC8 hodowano przez 72 godziny z inhibitorami IKK, zaróbką (DMSO) lub pożywką (bez Tx); Inhibitor IKK2 jest identyczny z IKK2i w A, a inhibitor IKK1 / 2 II jest identyczny z IKK1 / 2i w A; względne liczby komórek określono za pomocą CTG, przy czym średni odczyt dla grupy nieleczonej zdefiniowano jako 1. (C) Przebieg w czasie utraty komórek po leczeniu inhibitorem IKK; komórki traktowano jak w B i analizowano za pomocą CTG; średni odczyt dla nietraktowanej grupy w czasie 0 określono jako 1. (D) Odpowiedź na dawkę dla inhibitora IKK1 / 2 II po 72 godzinach; komórki traktowano i analizowano jak w B. (E) wytwarzanie IL-6 z komórek MDAC8 potraktowanych inhibitorami IKK, jak w B; IL-6 mierzono za pomocą testu ELISA. (B. E) Wyniki są reprezentatywne dla 2. 3 niezależnych eksperymentów, z 6 powtórzeniami na grupę. Paski błędów przedstawiają SEM. Wszystkie inhibitory IKK pochodziły z EMD Biosciences i były stosowane w następujących stężeniach, o ile nie wskazano inaczej: IKK2 inhibitor I (EMD IKK-2 Inhibitor IV), 10 .M; IKK2 inhibitor II (EMD IKK-2 Inhibitor VI), 5 (M; Inhibitor IKK1 / 2 I (BMS-345541), 40. M; IKK1 / 2 inhibitor II (EMD IKK Inhibitor VII), 20 .M. NF-kB może regulować wytwarzanie wielu zapalnych cytokin i chemokin. W związku z tym próbowaliśmy następnie określić wpływ hamowania IKK na wydzielanie cytokin przez komórki nowotworowe BALB / c TKO. Poziomy IL-6 były obniżone we wszystkich 4 badanych inhibitorach (w porównaniu z nośnikiem, P = 0,001 dla wszystkich warunków leczenia), co wskazuje na rolę NF-kB w autokrynnym wytwarzaniu IL-6 w tym układzie (Figura 6E). Podobnie, produkcja IP-10 była zmniejszona przez wszystkie 4 inhibitory IKK (P = 0,0009), a wydzielanie LIX (P = 0,02) i VEGF (P = 0,002) było zmniejszone w komórkach traktowanych połączonymi inhibitorami IKK1 / 2 (Suplementowa Figura 6). ); jednak specyfika tego ostatniego odkrycia jest trudna do określenia, biorąc pod uwagę słabą ogólną żywotność związaną z połączonym hamowaniem IKK1 / 2 [hasła pokrewne: martwa cisza cda, klasterowe bóle głowy, kozieradka zastosowanie ]