operacja przepukliny pachwinowej sposobem lichtensteina

Obserwowaliśmy również rozległą fluorescencję wzdłuż aksonu nerwu odpiszczelowego (ryc. 2L). Chociaż zaobserwowaliśmy silne barwienie dla PGP9.5, nie mogliśmy wykryć znaczącego sygnału sfGFP na zakończeniach nerwowych ani nagiej skóry, ani owłosionej skóry tylnej łapy myszy w preparatach na całej górze skóry (Figura 2M i dodatkowa Figura 2E). Ryc. 2sfGFP-NaV1.9 wzory ekspresji. (AaH) skrawki DRG z myszy sfGFP-NaV1.9 barwione dla wskazanych markerów. TH, hydroksylaza tyrozynowa. (I) Wykres obszaru komórkowego w DRG o całkowitej liczbie neuronów według wielkości komórki (czarne słupki), przy użyciu markera pan-neuronowego PGP9.5, jak również neuronów dodatnich pod kątem barwienia GFP (szare słupki, n. 200 GFP + neurony i n = 600 PGP9.5 +). (J) Wykres przedstawiający frakcję neuronów pozytywnych dla wskazanych markerów, które również były dodatnie dla GFP (neurony n = 200). (K. M) Przekroje rogów grzbietowych barwione GFP i IB4 (K), nerw odpiszczelowy barwiony GFP i PGP9.5 (L), i naga skóra tylnej łapy barwiona GFP i PGP9.5 (M) . Panele po prawej stronie każdego obrazu (K. M) pokazują powiększone zdjęcia odpowiedniej sekcji w białym polu. Skalowane pręty: 50 .m. Ekspresja NaV1.9 w neuronach MrgprA3 / MrgprC11. GPCRs MrgprA3 i MrgprC11 wyrażono w subpopulacji nocyceptorów związanych ze świądem niezwiązanym z histaminą (10). Aby zbadać, czy NaV1.9 znajduje się w neuronach wyrażających MrgprA3 i MrgprC11, użyliśmy myszy MrgprA3-GFPCretdTomato / + (8), w których neurony MrgprA3 +, które obejmują zarówno receptory MrgprA3 i MrgprC11, są znakowane białkiem fluorescencyjnym tdTomato. Podczas rejestracji patch-clamp byliśmy w stanie zidentyfikować prądy NaV1.9 we wszystkich neuronach tdTomato + DRG (ryc. 3, A i B). Następnie staraliśmy się określić koekspresję NaV1.9 z MrgprC11 przy użyciu zwalidowanego przeciwciała (54). W tym przypadku stwierdziliśmy, że 76% neuronów MrgprC11 + również wykazuje ekspresję NaV1.9 (Figura 3C). Ekspresja kanału była rzadko obserwowana w komórkach P + substancji (10%), innym podzbiorze neuronów, które były zaangażowane w kodowanie dla odczuwania swędzenia (odnośniki 10, 55 i Figura 3D). Chociaż stwierdziliśmy NaV1.9 w większości pruriceptorów uważanych za kodujące świąd przez członków rodziny Mrgpr, nie widzieliśmy tego podtypu kanału NaV we wszystkich przypuszczalnych neuronach świądowych. Figura 3: Ekspresja NlaV.9 w neuronach MrgprA3 + i MrgprC11 + i modele behawioralne. (A) Schemat ideowy strategii hodowlanej dla myszy MrgprA3-EGFP-CretdTomato / + pokazujących sygnał tdTomato (fluorescencja była wizualizowana bezpośrednio bez barwienia). (B) Trace pokazujące prądy NaV1.9 wywołane w neuronach tdTomato + przy określonych napięciach. (C) Sekcja DRG pokazująca nakładanie się neuronów zabarwionych na GFP i MrgprC11. (D) Sekcja DRG ilustrująca nakładanie się neuronów zabarwionych na GPF i substancję P. (E. G) Itch testuje ze wskazanym związkiem wstrzykniętym na kark, rejestrowanym dla 30-minutowych przedziałów, przeprowadzonym w NaV1,9. . kontrola myszy i miotu dla histaminy (E, 8 myszy na genotyp, P = 0,02), CQ (F, 12 myszy na genotyp, P = 0,006) i BAM8-22 (G; WT n = 11, NaV1,9. n = 8, P = 0,002). Panele znajdujące się bezpośrednio pod każdym wykresem (E. G) są danymi dzielonymi i wykreślane na każde 5 minut nagrania. * P <0,05, ** P <0,01, dwustronny, niesparowany test Studenta. Dane są reprezentowane jako średnie. SEM. Skalowane pręty: 50 .m. Utrata NaV1.9 prowadzi do zmniejszenia świądu. Aby zbadać stopień udziału NaV1.9 w swędzeniu, przeprowadziliśmy testy behawioralne z naszymi homozygotycznymi myszami FAST, które zawierają kasetę Neo-STOP do generowania globalnej linii nokautowej NaV1.9 (NaV1, l3 / l), a my porównali te wyniki z tymi z kontrolami z miotu WT. Oceniliśmy zachowanie drapania u myszy FAST przez podskórne wstrzyknięcie związków węchu do karku [patrz też: klasyfikacja icd 10, kolka nerkowa objawy, kora debu ]