Chociaż czasami widzieliśmy większe gęstości prądu NaV1.9, nie stwierdziliśmy znaczącego wzmocnienia NaV1.9 lub NaV1,8. Jednakże zastosowanie histaminy spowodowało hiperpolaryzowane przesunięcie napięcia aktywacyjnego o 6,5 mV w prądzie TTX-R (Figura 6, M. R). Obserwację, że nie wszystkie komórki wykazywały ten efekt w odpowiedzi na histaminę można wyjaśnić przez populację neuronów reagujących na histaminę tylko częściowo zachodzących na komórki reagujące na CQ i BAM8-22. Dlatego możliwe jest, że komórkom, które nie reagują, brakowało odpowiednich receptorów dla histaminy. Aby dodatkowo ocenić, czy CQ lub BAM8-22 wpłynęły na prądy NaV1.8, przejściowo transfekowaliśmy mysie NaV1.8 razem z MrgprA3 lub MrgprC11 w komórkach ND7 / 23. W komórkach zawierających NaV1.8 i MrgprA3, nie widzieliśmy zmienionej kinetyki aktywacji kanału po zastosowaniu CQ; jednakże zaobserwowaliśmy podobne zmniejszenie gęstości prądu w zakresie napięć (dodatkowa ilustracja 4, A i C). W komórkach transfekowanych NaV1.8 i MrgprC11, zanotowaliśmy porównywalne gęstości prądu i właściwości aktywacji kanału przed i po zastosowaniu BAM8-22 (Suplementowa Figura 4, B i D). Mutacja NaV1.9L799P / WT prowadzi do zwiększenia świądu u myszy. Następnie zastosowaliśmy strategię CRISPR / Cas9, aby wprowadzić ortologiczną mutację wzmocnienia funkcji p.L811P (c.2432T> C) do mysiego NaV1.9 (L799P / WT; c.2396T> C) w stosunku do naszego tła kasetowego tetO ( mysie i ludzkie białka NaV1.9 są w 73% identyczne). Po 5 krzyżowaniach wstecznych (najpierw z B6.C-Tg (CMV. Cre) 1Cgn globalna mysz Cre z The Jackson Laboratory), wykonaliśmy testy swędzenia na linii myszy L799P / WT i porównaliśmy dane z tymi otrzymanymi za pomocą WT NaV1.9. myszy (Figura 7A). Podobnie jak w przypadku pacjentów z ludzkim p.L811P + / WT, myszy L799P / WT wykazywały silne spontaniczne drapanie w porównaniu z kontrolnymi z miotu WT (Figura 7B). Wirtualna zgoda z poprzednimi obserwacjami (22), analiza RT-qPCR DRG z myszy sfGFP-NaV1.9L799P / WT ujawniła 68% redukcję ogólnych poziomów RNA SCNlla w porównaniu z poziomami w kontrolach WT (dodatkowa Figura 5). Figury Myszy 7sfGFP-NaV1.9L799P / WT wykazują wyższe bazowe zarysowania i więcej neuronów reagujących na CQ. (A) Schemat ideowy pokazujący wstawioną kasetę początkową do generowania myszy sfGFP-NaV1.9L799P / WT i następnej hodowli w celu wytworzenia myszy do eksperymentów. (B) Myszy sfGFP-NaV1.9L799P / WT wykazywały wyższy poziom zarysowania w porównaniu z ich kontrolkami z miotu (WT n = 8, sfGFP-NaV 1,9L799P / + n = 9, P = 0,043). (C = H) Ratiometryczne badania obrazowania Ca2 + Fura-2 przeprowadzono na myszach sfGFP-NaV1.9L799P / + i kontrolach z miotu. Po podaniu histaminy nie zaobserwowano żadnych różnic w całkowitym odsetku neuronów odpowiadających na leczenie (C, WT i sfGFP-NaV 1,9L799P / WT n. 700 komórek, P = 0,15) ani na podstawie wielkości odpowiedzi (D, WT i NaV1.9 p / yl <700 komórek, P = 0,36). W przypadku BAM8-22 nie zaobserwowano żadnych różnic ani w przypadku odsetka komórek reagujących (E, WT i sfGFP-NaVl, 19L799P / WT nf 700 komórek, P = 0,19) ani wielkości odpowiedzi (F; WT i sfGFP- Komórki NaV1,9 779P / WT n = 700, P = 0,83). W przypadku CQ odsetek komórek reagujących był znacząco wyższy (G, WT i sfGFP-NaVl, 9L799P / WT n. 700 komórek, n = 0,042), ale nie zaobserwowano żadnej różnicy w wielkości odpowiedzi (H; WT i sfGFP). -NaV1, 9L799P / WT n = 700 komórek, P = 0,59). (I) RMP w MrgprA3 + DRG z WT (<40,0. 1,3 mV, n = 13) i myszy NaV1,9L799P / WT (. 23,9. 1,8 mV, n = 21) różnią się znacznie (P = 0,0007). (J. L) WT MrgprA3 + neurony wymagają. 50 pA prądu do wstrzykiwań w impuls (J), podczas gdy MrgprA3 +; NaV1.9L799P / WT DRG składają się z podzestawu (17/21), który nie strzela z AP przy dużych zastrzykach prądu (. 500 pA; RMP => 42 mV) i mniejszej grupy (4/21), które wystrzeliwują w odpowiedzi na obecne wstrzyknięcia tak niskie, jak 10 pA i powtarzające się punkty AP w 50 pA (RMP = <26 mV) (K i L) [podobne: klasyfikacja icd 10, olx sulechów, klasterowe bóle głowy ]
Random entries
Doustna erytromycyna i ryzyko nagłej śmierci z przyczyn sercowych
Doustna erytromycyna wydłuża czas repolaryzacji serca i jest związana z przypadkami torsades de pointes. Ponieważ erytromycyna jest w znacznym stopniu metabolizowana przez izoenzymy cytochromu P-450 3A (CYP3A), powszechnie stosowane leki… Read More Doustna erytromycyna i ryzyko nagłej śmierci z przyczyn sercowych
Poziomy alfa-fetoproteiny w drugiej macierzyńskiej matce w okresie trymestru i późniejsze ryzyko nagłej śmierci niemowląt ad 5
DevURLKwantyle poziomu alfa-fetoproteiny w surowicy matki, wyrażone jako wielokrotności mediany dla wieku ciążowego, były mniejsze lub równe 0,77; większy niż 0,77, ale mniejszy lub równy 0,93; większa niż 0,93, ale… Read More Poziomy alfa-fetoproteiny w drugiej macierzyńskiej matce w okresie trymestru i późniejsze ryzyko nagłej śmierci niemowląt ad 5
Tags
bogowie cda
kalafior wartości odżywcze
kalarepa kalorie
kalprotektyna
kardiowersja elektryczna
klasterowe bóle głowy
klasyfikacja icd 10
kminek właściwości
kolano budowa
kolka nerkowa icd 10
kolka nerkowa objawy
kora debu
kozieradka zastosowanie
krążek międzykręgowy
kłykciny kończyste leczenie
martwa cisza cda
mcz lubin
olx myślenice
olx parczew
olx sulechów
uxtorpeda allegro